Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
LS = \ Суммарное число L + Суммарное число С + Суммарное число С
1 Число полусекций Число полусекций Число полусекций
Для каждой группы положительных обезьян рассчитывают среднее значение уровня повреждений.
Оценка. Сравнение вирусной активности в вакцине и в препарате сравнения основано на активности в поясничном расширении корда и степени распространения активности из этого региона в шейное расширение и головной мозг. Положительное или отрицательное решение основано на общем уровне для всех животных, подвергнутых испытанию. Необычно высокая активность как в поясничном отделе, так и в результате распространения из этого региона, обнаруженная у отдельных животных, также должна приниматься во внимание при вынесении окончательного решения. Моновалентный материал выдерживает испытание, если имеется требуемое количество положительных животных и если ни в одном из клинических и гистопатологических исследований не выявлено существенных различий в патогенности между вирусом вакцины и препаратом сравнения. Критерии положительного решения приведены ниже.
Критерии. Для каждой из вакцин сравнения (типов 1, 2 и 3) проводят подходящее количество (например, четыре) квалификационных испытаний на вирулентность с целью получения данных об активности этих вакцин как основы критериев для оценки испытуемых вакцин. Для повторных испытаний каждого из стандартных вирусов вычисляют общий средний уровень повреждений (М), а также суммарную оценку дисперсии (s2) и отклонения (s) результатов испытания.
Критерии достоверности результатов испытания препарата сравнения устанавливаются на основе данных, накопленных в квалификационных испытаниях. Общепринятых критериев не имеется; для лабораторий с ограниченным опытом работы может быть полезен следующий эмпирический метод установления допустимых пределов среднего уровня повреждений для препарата сравнения (Xref):
Таблица 2.6.19.-1
Нижний предел Верхний предел
Типы 1 и 2 M - s M + s
Тип 3 M - s/2 M + s
Если средний уровень повреждений испытуемой вакцины равен Xtest, а С1; C2 и C3 - константы, определенные ниже, то:
Вакцина не выдерживает испытание при:
Xtest - Xref > C1
Вакцина может быть однократно подвергнута повторному испытанию при:
C1 < Xtest - Xref < C2
Если вакцина испытывается повторно, средние значения уровней повреждений для испытуемой вакциной и препаратом сравнения рассчитываются заново. Вакцина не выдерживает испытание при:
у — у
(testl+test2) (ref 1+ref 2) > с
2 > 3
Константы C1, C2 и C3 вычисляют по формулам:
C, = 23
\2s2
nt
С3 = 1,6
2s2
N
где :
Ni - количество положительных обезьян при испытании вакцины,
N2 - количество положительных обезьян в двух испытаниях,
2,3 - нормальное отклонение для 1% уровня,
2.6 - нормальное отклонение для 0,5% уровня,
1.6 нормальное отклонение для 5% уровня.
Испытание на нейровирулентность, в котором получен средний уровень повреждений препарата сравнения (Xref), несовместимый с предшествующим опытом, не используется для оценки испытуемой вакцины. Если результаты испытания достоверны, вычисляют средний уровень повреждений для испытуемой вакцины (Xtest) и сравнивают его с соответствующим значением для гомотипической стандартной вакцины.
2.6.20. АНТИ-А И АНТИ-В ГЕМАГГЛЮТИНИНЫ (НЕПРЯМОЙ МЕТОД)
Готовят два серийных разведения испытуемого препарата в растворе натрия хлорида R концентрацией 9 г/л. К каждому разведению одного ряда добавляют равный объем суспензии эритроцитов группы Аі концентрацией 5 объемных процентов, предварительно трижды промытых раствором натрия хлорида. К каждому разведению другого ряда добавляют равный объем суспензии эритроцитов группы В концентрацией 5 объемных процентов, предварительно трижды промытых раствором натрия хлорида. Суспензии инкубируют при температуре 370С в течение 30 минут, затем клетки трижды промывают раствором натрия хлорида. Клетки оставляют в контакте с поливалентным антиреагентом человеческого иммуноглобулина в течение 30 минут. Каждую из суспензий, не подвергая центрифу-гировангию, исследуют под микроскопом на агглютинацию.
2.6.21. МЕТОДЫ АМПЛИФИКАЦИИ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ
1. ВВЕДЕНИЕ
Методы амплификации нуклеиновых кислот основаны на двух различных подходах:
1. Амплификация последовательности-мишени нуклеиновой кислоты с использованием, например, полимеразной цепной реакции (ПЦР), лигазной цепной реакции (ЛЦР) или изотермической амплификации рибонуклеиновой кислоты (РНК).
2. Амплификация сигнала гибридизации с использованием, например, для дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) метода разветвленной ДНК (bDNA). В этом случае амплификация сигнала достигается без подвергания нуклеиновой кислоты повторяющимся циклам амплификации.
